一 操作规程

1. 开机：

①取下防尘罩，依次打开电脑桌右侧“PC Microscope”、“Scanner Power”及“Laser Power”三个圆形按钮，中间间隔10s，然后将“Laser Power”按钮右侧的激光开关钥匙（Laser Emission）顺时针旋转 90 度至“On-1”位置；

②打开荧光电源；

③登录用户名和密码后进入系统，双击电脑显示屏桌面上的“LAS AF”图标启动共聚焦软件（第一个提示选择“OK”，第二个选择“No”）

④选择“Configuration”模块，点击“Laser”，打开需要的荧光；

激光	激发波长
405 Diode	405 nm
Argon（20%）	458,476,488,514 nm
DPSS 561	561nm
HeNe 594	594 nm
HeNe 633	633 nm

HeNe 633 633 nm

⑤回到“Aquire”模块设置光路

2. 显微镜操作

①常用按钮：TL/IL-明场切换，INT-白光强度调节，AP-孔径光阑，FD-视场光阑，正面1位-绿光，正面2位-红光，正面5位-蓝光，鼠标左上下-调节镜头，鼠标右上下-粗细调，鼠标正前-调焦面，鼠标正后上下-调节载物台；

②将样品放在载物台上（倒置），动作要轻微，禁止用力按压；调节位置和焦距，切换荧光观察；

③油镜使用：滴一小滴油在镜头上，让样品与镜头形成液面后在微调焦面，每次更换样品后观察是否需要加油，使用完毕后用蘸有酒精的擦镜纸擦拭干净，再用擦镜布擦干镜头；

3. 设置扫描程序

①选择扫描模式：“xyz”或“xyt”

②打开“SEQ”，根据实验需要设置相应的通道数，选择“Between

Frames”，并依次设置各个通道的激发光和发射光；

③设置扫描参数，点击“Live”预览

	Live预览	Start拍照
分辨率format	512*512	1024*1024
扫描速度speed	400HZ	100HZ
线平均(line average)	–	2
面平均(frame average)	–	1或2
放大倍数(zoom)	选择“OFF”键放大	–

4. 调节图像

①选择“Quick LUT” 按钮（灰度图）调节图像质量

②调节“SuperZ” z 轴位置找到最适合观察的焦平面，

③调节 PMT 的电压值(Smart Gain，不超过900)或激光输出功率调节荧光强度，及偏移值(Smart Offset)扣除背景（-0.2%~-1.0%），使图像达到最佳。

5. 保存数据

①每次更换样品点击“New”新建文件夹并命名

②首先选择文件夹右键“Save All”，再单独选择图片储存两次，右键“Export”-“As TIFF”，选择路径，分别勾选“Overlay Channel”保存

6. 关机

数据保存完毕后，回到“Configuration”模块，关闭所有激光，再关闭程序，等到风扇声音降低后再从右到左依次关闭绿色按钮。

二 常见问题解决

1. 程序与显微镜失去连接：表现为“Live”为灰色不可用，需直接关闭程序重启电脑

2. 开机时程序出现错误无法连接：全部关闭并重启

3. 如遇到其他问题，马上停止实验，打电话求助工程师